细胞培养技术 细胞培养技术流程图解

节选片段：

首先是准备各种溶液。

第一是配制溶液过程中要用到的水。水用纯水，高压灭菌之后，再去内毒素。去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。

第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。

现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。再用灭菌去内毒素水稀释成1×培养液。

第三，完全培养液的配制：培养液加上合适比例的血清即可。但血清一般保存于－20℃，一般解冻是放在4℃冰箱解冻，耗时长，而且必须解决完全之后，才能进行完全培养基的配制。

所以要提前几个小时就将血清从－20℃转入4℃，以期完全解冻。当然如果这一次就需要用完的话（是指用这些血清配制的培养液都用完），也可以放到37℃解冻。

第四，最重要的是保证过程中无菌。液体必须要分装。无论过程中用到的培养液、胰酶、血清、PBS、生理盐水、抗生素尽量分装。分装是为了防止污染。如果操作有误，仅能威胁到其中一支，而非整个。培养液、血清、PBS、生理盐水分装为20mL、50mL或100mL/管。胰酶、抗生素可分装为1mL/管。分装最好先于细胞操作

第五，操作之前，培养液先放到37度的细胞培养箱里复温。原因：尽量减少对细胞的刺激。低温对于细胞也是一个刺激因素。

第六，操作之前，大脑先过一遍此次操作所需要用到的所有用具。将所有用具先放到无菌台面上。减少拿入拿出的动作，保证无菌。（如果万一发现少拿了什么，也不要紧，再加上就是。如果是枪头盒、移液管等用具，最好先用消毒酒精喷一下）。

第七，操作之前，带着的手套先喷消毒酒精。然后再进入工作台。等一分钟，等手套上的酒精挥发之后再进行操作。